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L' immunoprecipitazione della Cromatina (ChIP) è un metodo ampiamente usato per
identificare le proteine specifiche connesse con una regione del genoma, o al
contrario, per identificare le regioni del genoma connesso con le proteine
specifiche. Queste proteine possono essere isoforme degli istoni modificati ad
un amminoacido particolare o ad altre proteine associate alla cromatina. Quando
viene utilizzato con gli anticorpi che riconoscono le modifiche dell'istone, il
ChIP può essere usato "per misurare" la quantità della modifica. Un esempio è la
misura della quantità di acetilazione dell'istone H3 connessa con una regione
specifica del promotore del gene nelle varie circostanze che potrebbero alterare
l'espressione del gene. Gli istoni non sono le uniche proteine che possano
essere studiate usando questa tecnica. Gran parte dell'interesse recente è
focalizzato anche nell'analisi della distribuzione dei fattori di trascrizione.
L'utilizzo del ChIP prevede che le cellule siano inizialmente fissate con formaldeide per effettuare il crosslink del DNA e poi la Cromatina viene raccolta dalle cellule e sottoposta ad un processo di immunoselezione, che richiede l'uso degli anticorpi specifici. Tutte le sequenze del DNA unite con crosslink alla proteina di interesse coprecipiteranno come componente del complesso della cromatina. Dopo l' immunoselezione dei frammenti di cromatina e purificazione di quelli associati a DNA, la rivelazione delle sequenze di DNA specifiche viene svolta. Se il DNA che sarà rilevato è associato alla modifica dell'istone o della proteina che è esaminata, la rappresentazione relativa di quella sequenza del DNA sarà aumentata (o sarà arricchita) tramite il processo di immunoprecipitazione. Solitamente una PCR standard è effettuata per identificare la sequenza del DNA (il gene o la regione del genoma) connessa con la proteina di interesse. |
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